RESUMO
This study describes the effect of sphingosine 1-phosphate (S1P) for development of preantral follicle, therefore the activation and follicular viability of caprine follicles cultured in vitro. Ovarian fragments were cultured for 1 or 7 days in Minimum Essential Medium with different S1P concentrations (0, 1, 10, 50, 100 or 200ng/mL). All ovarian fragments were processed for histological analysis in optical microscopy, transmission electron microscopy and fluorescence analysis. The treatment using 1ng/mL of S1P was able to maintain the percentage of normal follicles with the progression of the culture from day 1 to 7. At end of the 7-day culture period there was a significant reduction (P<0.05) in the percentage of primordial follicles in all groups treated with S1P, compared with fresh control (FC) and Control Culture (CC), which was followed by an increase of activated follicles (intermediary, primary and secondary). In addition, the culture for 7 days with media supplemented with S1P with 1ng/mL preserved the ultrastructure of organelles and kept the preantral follicular viability when evaluated by fluorescence microscopy. In conclusion, after 7 days of culture, the 1ng/mL of S1P activates the development of preantral caprine follicles, cultured in situ and maintains the oocitary and follicular viability...
Este estudo descreve o efeito da esfingosina 1-fosfato (S1P) no desenvolvimento de folículos pré-antrais, portanto da ativação e viabilidade de folículos caprinos cultivados in vitro. Fragmentos de ovários foram cultivados por um ou sete dias em meio essencial mínimo com diferentes concentrações de S1P (0, 1, 10, 50, 100 ou 200ng/mL). Os fragmentos de ovário foram processados para análise histológica em microscopia óptica, microscopia eletrônica e microscopia de fluorescência. O tratamento usando 1ng/mL de S1P foi capaz de manter a porcentagem de folículos normais durante o período de cultivo de sete dias. Ao final do período de cultivo, houve uma redução significativa (p<0,05) na porcentagem de folículos primordiais em todos os grupos tratados com S1P, comparados com os grupos controle (FC e CC), seguida por um aumento do número de folículos ativados (intermediários, primários e secundários). Adicionalmente, na cultura por sete dias com meio suplementado com S1P (1ng/mL), houve preservação da ultraestrutura das organelas e manteve-se a viabilidade dos folículos pré-antrais avaliados por microscopia de fluorescência. Em conclusão, após sete dias de cultura, o meio suplementado com 1ng/mL de S1P ativa o desenvolvimento de folículos pré-antrais de caprino, cultivados in situ e mantém as viabilidades oocitária e folicular...
Assuntos
Animais , Feminino , Cabras/embriologia , Esfingosina/genética , Folículo Ovariano/crescimento & desenvolvimento , Folículo Ovariano , Microscopia de Fluorescência/veterinária , Técnicas de Maturação in Vitro de Oócitos/veterináriaRESUMO
The growth factor receptor-bound protein 14 (Grb14) is a cellular adapter protein belonging to the Grb7 family of proteins. Studies with human and rodent cells have demonstrated that Grb14 acts as a negative regulator of tyrosine kinase receptor signalling through the MAPK and PI3K pathways. In cattle, tyrosine kinase receptors are activated during follicular development but the role of Grb14 in this process has not yet been investigated. Therefore, the aim of the present study was to characterize Grb14 mRNA expression in ovarian somatic cells during follicular growth and deviation in cattle. We found Grb14 mRNA expressed in both granulosa and theca cells derived from follicles at different stages of development (3-5 , 6-8, >8 mm in diameter). The abundance of mRNA for Grb14 was higher in granulosa cells of subordinate compared with those from dominant follicles at days 3 and 4 of the follicular wave (p < 0.05). Further, there was a negative correlation between the abundance of mRNA for Grb14 and P450Arom in granulosa cells (R(2) = 0.367; p < 0.05) and between the abundance of mRNA for Grb14 in granulosa cells and concentration of oestradiol in follicular fluid (R(2) = 0.545; p < 0.05). In theca cells, the expression of Grb14 mRNA did not differ between dominant and subordinate follicles (p > 0.05). These findings suggest that Grb14 may play a regulatory role in granulosa cells during follicular deviation in cattle.
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Proteínas Adaptadoras de Transdução de Sinal/metabolismo , Bovinos/fisiologia , Regulação da Expressão Gênica/fisiologia , Folículo Ovariano/crescimento & desenvolvimento , Folículo Ovariano/metabolismo , Proteínas Adaptadoras de Transdução de Sinal/genética , Animais , Feminino , Folículo Ovariano/citologia , RNA Mensageiro/genética , RNA Mensageiro/metabolismoRESUMO
The immunohistochemical expression of p63, DeltaNp63, and p53 was studied in mixed tumors of canine mammary glands (13 benign mixed tumors and 19 carcinomas arising from benign mixed tumors) to determine the role of p63 and its isoform DeltaNp63 in the development of mixed tumors, as well as to assess its relation with p53. P63 was expressed in myoepithelial cells of all benign mixed tumors and in 18 of 19 carcinomas in mixed tumors. The p63-negative carcinoma in mixed tumors was invasive, and a loss of p63 was detected in the other malignant tumors showing a discontinuous p63-stained myoepithelial layer. DeltaNp63 was expressed in all benign mixed tumors but only in p63-positive carcinomas in mixed tumors. Despite its positive correlation with p63 expression in carcinomas in mixed tumors (r = 0.8323, P < .00001), DeltaNp63 expression showed a decrease in benign tumors. Positivity for p53 was detected in 2 of 13 and 1 of 19 benign mixed tumors and carcinomas in mixed tumors, respectively. There was no correlation between p63 or DeltaNp63 and p53 expression. Our data support the notion that the decrease of p63 expression, in particular of its isoform DeltaNp63, seems to be an important factor in the development of carcinomas in mixed tumors.
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Regulação Neoplásica da Expressão Gênica/fisiologia , Imuno-Histoquímica/veterinária , Proteínas de Membrana/metabolismo , Tumor Misto Maligno/veterinária , Proteína Supressora de Tumor p53/metabolismo , Animais , Carcinoma/metabolismo , Carcinoma/veterinária , Doenças do Cão/genética , Doenças do Cão/metabolismo , Cães , Feminino , Neoplasias Mamárias Animais/metabolismo , Proteínas de Membrana/genética , Tumor Misto Maligno/metabolismo , Isoformas de Proteínas , Proteína Supressora de Tumor p53/genéticaRESUMO
The presence of annexin II (Ann-II) during the initial stages of bovine embryo development and the regulation of Ann-II expression by retinol and insulin-like growth factor I (IGF-I) were studied. Bovine embryos at different stages of development were produced in vitro on Synthetic Oviductal Fluid (SOF) medium (control group), SOF supplemented with retinol (retinol group; 0.1ng/ml), or IGF-I (IGF-I group; 10ng/ml). The embryos were processed for mRNA extraction, cDNA production and polymerase chain reaction (PCR) using Ann-II-specific oligonucleotides. Ann-II was detected in all stages of early embryo development, except for the 16-cell stage. The blastocyst rates were significantly higher (P<0.05) in the group supplemented with retinol (37.8 percent, 45/119) during in vitro embryo culture (IVC) than in those cultured in SOF (20.5 percent, 24/117) or SOF with IGF-I (25.8 percent, 24/93). Semiquantitative analysis of Ann-II expression in embryos produced in medium supplemented with IGF-I or retinol revealed a lower expression of this gene when compared with embryos cultured in SOF (P<0.05). The Ann-II expression was not different in embryos cultured in the presence of retinol and IGF-I. The presence of retinol increased the production of embryos in vitro by decreasing the expression of Ann-II in early-stage of bovine embryo
Foram estudadas a presença de anexina II (Ann-II) durante a fase inicial do desenvolvimento embrionário bovino e sua regulação pelo retinol e pelo fator de crescimento semelhante à insulina (IGF-I). Embriões bovinos em diferentes estádios de desenvolvimento foram produzidos in vitro em fluido sintético de oviduto (SOF) sem suplementação (grupo-controle) ou suplementado com retinol (grupo retinol; 0,1ng/ml medium) ou IGF-I (grupo IGF-I; 10 ng/ml de meio). Os embriões foram processados para extração de mRNA, produção de cDNA e posterior análise por reação em cadeia da polimerase (PCR) com oligonucleotídeos específicos para Ann-II. Em todos os estádios de desenvolvimento embrionário, Ann-II foi detectada, exceto no estádio de 16 células. Os índices de blastocisto foram significativamente maiores (P<0,05) no grupo suplementado com retinol (37,8 por cento, 45/119) durante o cultivo in vitro de embriões (PIV) que aqueles obtidos no grupo controle (20,5 por cento, 24/117) ou no IGF-I (25,8 por cento, 24/93). Análise semiquantitativa da expressão de Ann-II em embriões produzidos em meio suplementado com IGF-I ou retinol revelou uma menor expressão desse gene quando comparado com embriões cultivados somente em SOF (P<0,05). A expressão de Ann-II não foi diferente em embriões cultivados na presença de retinol e IGF-I. A presença de retinol aumentou a produção de embriões in vitro, e diminuiu a expressão de Ann-II em estádios iniciais do desenvolvimento embrionário bovino
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Animais , Gravidez , Bovinos , /sangue , Desenvolvimento Embrionário , Vitamina A/uso terapêuticoRESUMO
Estudou-se a associação entre polimorfismos de conformação de fita simples (SSCP) no gene do receptor do fator-l de crescimento semelhante à insulina (lGF-lR) e idade ao primeiro parto (lPP), intervalo entre partos (IEP), duração da lactação (DL) e produção de leite (PL), em 106 fêmeas puras por cruza da raça Holandesa. A reação em cadeia da polimerase (PCR) com oligonucleotídeos iniciadores específicos gerou um fragmento de 335pb. A freqüência genotípica da população para o polimorfismo foi 82,1% de indivíduos homozigotos para o alelo A e 17,9% de heterozigotos (AB). A freqüência do alelo A foi 0,91 e a do alelo B, 0,09. Não foi encontrada associação entre o polimorfismo estudado e as características lPP, lEP e PL. A característica DL foi positivamente associada (P<0,05) à ausência do alelo B. A lactação dos animais portadores do genótipo AA foi mais longa.
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Animais , Feminino , Bovinos , Polimorfismo Genético/genética , Reação em Cadeia da Polimerase/métodos , Receptor IGF Tipo 1/isolamento & purificaçãoRESUMO
Verificou-se a influência da proteína quinase C (PK-C) no reinício e na progressão da meiose em oócitos bovinos, determinando se as células do cumulus são mediadoras da PK-C na regulação da maturação dos oócitos. Complexos cumulus-oócitos (CCO) e oócitos desnudos (OD), distribuídos aleatoriamente em seis tratamentos (T) com base na presença de um ativador da PK-C (PMA) (T1 e T2), de um forbol éster incapaz de ativar a PK-C (4alfa-PDD-controle) (T3 e T4) ou de apenas o meio básico (TCM-199-controle) (T5 e T6), foram cultivados por 7, 9, 12, 18 e 22 horas. A percentagem de rompimento da vesícula germinativa no grupo cultivado com PMA foi maior do que nos dois grupos controle, com e sem células do cumulus. O cultivo de CCO e OD por 12 e 18 horas demonstrou que a PK-C influencia a progressão para os estádios de metáfase I (MI) e metáfase II (MII) de maneira dependente das células do cumulus. Nos períodos de 9 e 22 horas, não foi possível observar diferença entre os grupos quanto aos diferentes estádios de maturação. A ativação da PK-C acelera o reinício da meiose independentemente das células somáticas e acelera a progressão até os estádios de MI e MII na dependência das células do cumulus.
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Animais , Bovinos , Células , Meiose , Oócitos , Ovário , Proteína Quinase C , Fator Promotor de MaturaçãoRESUMO
The aim of the present study was to characterize ovarian follicular development and steroid concentrations during postpartum and the estrous cycle of Brangus Ibagé cows (3/8 Nelore + 5/8 Aberdeen Angus) with different levels of fertility. Cows were classified as having high or low fertility according to the calving interval (CI). The average CI of the herd from which cows used in this study were selected was 404.6+/-5.44 and 711.2+/-20.89 days for the high and low fertility groups, respectively. Four cows of high fertility and five cows of low fertility had calves removed between 70 and 100 days after parturition. Ovarian activity was monitored daily by ultrasound for 16 days after calf removal. Days to emergency of the first follicular wave after calf removal, number of follicles with diameter >9 mm, growth rate of largest follicle, maximum diameter of largest follicle, length (days) and number of follicular waves were recorded. During this period, blood was collected daily for measurements of serum progesterone (P(4)) and estradiol (E(2)) concentrations. In another experiment, ovarian activity and P(4) and E(2) concentrations were examined during estrous cycle in five cows of high fertility and four cows of low fertility. Ovarian activity and steroid concentrations were assessed from the day prior to estrus to the 15th day of the estrous cycle (estrus = day 0). In postpartum cows of high fertility, the total number of follicles >5mm and the maximum diameter of the largest follicle were higher than in cows of low fertility (P < 0.05). Concentrations of P(4) and E(2) did not differ between groups in the postpartum cows. However, E(2) increased 5 days after calf removal (around 90 days of postpartum) in the high fertility group, followed by an increase in P(4) with average values indicating ovulation around 100 days postpartum. In cycling cows, the profile of follicular development was similar between cows of high and low fertility. There was no difference between groups for number of follicles >5mm, but the day effect was significant (P < 0.01). Plasma concentrations of P(4) and E(2) were similar in both groups. These data suggest that cows, from a population raised in the same environment have different fertility as a consequence of individual physiological characteristics.
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Doenças dos Bovinos/fisiopatologia , Bovinos/fisiologia , Fertilidade/fisiologia , Distúrbios Nutricionais/veterinária , Folículo Ovariano/fisiologia , Fenômenos Fisiológicos da Nutrição Animal , Animais , Bovinos/sangue , Doenças dos Bovinos/sangue , Estradiol/sangue , Estro/fisiologia , Feminino , Distúrbios Nutricionais/sangue , Distúrbios Nutricionais/fisiopatologia , Estado Nutricional , Período Pós-Parto/fisiologia , Gravidez , Progesterona/sangue , Fatores de TempoRESUMO
Este trabalho teve por objetivo avaliar a eficiência de tratamentos hormonais sobre a fertilidade de vacas de corte no pós-parto com diferentes condiçöes corporais, durante a estaçäo de monta de outono. Setenta e três vacas pluríparas cruzadas (Hereford x Nelore) criadas extensivamente, com condiçäo corporal entre 2 e 4, foram pesadas e distribuídas em três grupos experimentais. O grupo GSED, constituído por 25 vacas, recebeu pessário vaginal (dia 0) contendo 250mg de acetato de medroxiprogesterona e 500mg de somatotropina bovina recombinante (bST-r). Na retirada dos pessários (dia 7), as vacas receberam 0,5mg de cipionato de estradiol e procedeu-se o desmame temporário dos bezerros por 72 horas. No grupo SED, 25 vacas receberam tratamento semelhante ao grupo GSED, porém näo receberam bST-r. No grupo-controle, as 23 vacas somente foram separadas dos seus bezerros por 72h. Quando da retirada dos pessários as vacas foram colocadas com touros por 30 dias. Os animais foram pesados e avaliados quanto à condiçäo corporal no início do experimento e naretirada dos touros (dia 37). Foi constatada perda média de peso de 0,648 Kg/dia e os percentuais de estro foram de 26,1 por cento, 33,3 por cento e 56,5 por cento, respectivamente, para os grupos controle, SED e GSED. O diagnóstico de gestaçäo, realizado pela palpaçäo retal 60 dias após a retirada dos touros, indicou percentuais de prenhez de 13,0 por cento, 8,3 por cento e 21,7 por cento, respectivamente, para os grupos controle, SED e GSED (P=0,16), demonstrando que os programas hormonais adotados näo foram eficientes no incremento das taxas de prenhez de vacas que perdiam peso entre 50 e 70 dias após o parto
